用什么样的数据统计主要看你的实验要求。直接用OD值、细胞存活率、细胞抑制率都可以。文献中上述几种表示方法都有,你可以看看。自己绘制曲线完全可以,用EXCEL或SPSS都可以。
接种细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔 1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200ul.2:培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。
MTT是测试细胞数量和活度的方法。我觉得你可能在控制细胞数量的时候没有做到等同,因为很多操作上的因素会影响。比如,你操作时间太长会让大量的细胞贴壁,而你还认为细胞密度是一样的,就会使后面加到的样品细胞数量减少。所以我建议你看看细胞数量上的问题。当然,也不排除染菌了。
你的解释是有道理的。处于对数生长期的细胞对药物是最敏感的,而对数生长期的细胞就是似满非满,长得太满的细胞肯定已过对数生长期,你要对接种的细胞浓度摸索一下,细胞生长的速度与达到对数生长期的时间有关,不同浓度达到对数生长期的时间不同,也就是说,你用药的时间与接种的细胞浓度有关。
做MTT时,用96-well plates的话,一般每孔分5000个或10000个细胞,加100ul培养基,培养24h后,加入不同浓度的药物,每个浓度的药物一般设3-6个平行样。给药24或者72h后,加入MTT,使其终浓度为5%(比如5mg/ml的MTT加10ul)。
药物组织分布用Drug And Statistics软件算。药物组织分布是指药物吸收后随血液循环到各组织间液和细胞内液的过程。
做MTT时,用96-well plates的话,一般每孔分5000个或10000个细胞,加100ul培养基,培养24h后,加入不同浓度的药物,每个浓度的药物一般设3-6个平行样。给药24或者72h后,加入MTT,使其终浓度为5%(比如5mg/ml的MTT加10ul)。
⒌MTT法只能测定细胞相对数和相对活力,不能测定细胞绝对数。做MTT时,尽量无菌操作,因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。⒍理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整。⒎实验时应设置调零孔,对照孔,加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。
可以提高药物起始浓度。做这种药物试验,一般都是要要做药物梯度实验的。如果要算抑制率,得做空白对照组就是不加药物的细胞孔。用此孔OD减去实验组OD在除以空白对照OD,为了试验的准确性,每组药物浓度都是要做3个以上的副孔,算平均值。
1、要计算细胞抑制率,用1减去所得到的增殖率即可。
2、实验步骤DAY 1: 离心并计数处于对数期生长的细胞。 在96孔板中均匀接种细胞,培养24小时。 DAY 2: 选择生长良好的细胞,配置不同浓度的样本溶液,培养后观察。 DAY 3/4: 解冻并离心MTT试剂,配置0.5mg/mL溶液。 加入MTT溶液,4小时后去除上清,溶解甲臜,测量570nm的吸光度。
3、mtt检测法其检测原理为,活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶,能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
4、血流灌注MTT是一项非常安全的检查方法,对患者的身体没有任何伤害。该方法无需手术或长期住院治疗,仅需注射一种无害的溶液即可。该方法不仅能够为医生提供非常准确的诊断结果,还可以在治疗中提供更好的治疗方案。因此,在对患者进行神经系统疾病的治疗时,血流灌注MTT是一项非常有用和必要的检查手段。
1、mtt检测法是一种检测细胞存活和生长的方法。mtt检测法其检测原理为,活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶,能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
2、目前MTT法常用于以下几个方面的研究:检测细胞活性:常作为细胞毒性试验的一种方法。体外药物敏感实验:该方法简便、经济、快速,重复性好,所需的细胞数较少,目前广泛的用于临床前的抗癌药物的筛选研究。一些细胞因子活性的研究。
3、药物MTT法实验步骤:贴壁细胞: 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度1000- 10000 /孔,每次加入细胞的枪头贴着96孔的四周,旋转缓慢加入,加入细胞后可前后左右水平摇晃几下,以让细胞铺板更佳。
4、MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。
药物MTT法实验步骤:贴壁细胞: 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度1000- 10000 /孔,每次加入细胞的枪头贴着96孔的四周,旋转缓慢加入,加入细胞后可前后左右水平摇晃几下,以让细胞铺板更佳。
步骤如下:1:接种细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔 1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200ul.2:培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。
一)原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备 青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2O中,抽滤除菌。
“四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)”,即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法。MTT是一种噻唑盐,化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色。
MTT实验:深入解析与关键步骤MTT实验在生物学领域有着广泛的应用,涵盖细胞增殖、毒性、活性评估、药物筛选以及肿瘤放射敏感性测试等多个方面。以下将详细探讨实验原理、所需设备和试剂、步骤详解以及重要注意事项。实验应用细胞增殖测定:MTT通过测量活细胞中的Formazan形成来反映细胞数量。
一般是两倍梯度稀释,第一孔加200ul含有药物的培养液,第二孔加100ul培养液,第三孔加100ul培养液。。从第一孔取100ul加到第二孔混匀,从第二孔取100ul加到第三孔混匀,第三孔取100ul扔掉。。
收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。
同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)。